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WB白板的原因

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时间:2022-09-28????浏览: ??【 打印此页】??【 关闭


1、WB白板的原因
① 首先要考虑蛋白提取问题,样本浓度是否过低,正常Western实验每孔需要20-40μg左右的蛋白;
②一抗的稀释比例,一般新手做WB都会按照说明书的比例去做,一般说明书都是1:500-2000之间的比例,如果是白板就需要加大抗体比例,如果按说明书的最低推荐比例还是“白板”,那应该不是稀释比例的问题了;
③一抗孵育时间,常规的一抗孵育条件是4℃过夜,有时候抗体反应比较“迟钝”可能需要更强烈的孵育时间,比如延长孵育时间至2天,或者把摇床放入冰箱缓慢摇动孵育过夜,大家不建议37℃进行抗体孵育;
④ 显色体系的选择,一般来说ECL化学发光要比DAB灵敏5-10倍以上,所以尽量使用ECL;ECL发光液也分很多种,普通型、灵敏型、超灵敏型,大家都尝试过,的确在信号上有非常明显的差异;当然延长曝光时间也是提高信号灵敏度最常规的方法。
 

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