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WB转膜条件及注意事项

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时间:2022-09-30????浏览: ??【 打印此页】??【 关闭


1、转膜条件
对于分子量10-15kDa的指标转膜时间不宜过长,100V、冰浴45min足矣;对于分子量指标150kDa以上的指标,100V、冰浴2h也足够了;其他介于15-150kDa之间的指标100V、冰浴1h完全可以保证效果。
2、转膜操作
准备PVDF膜的大小要与切割后的凝胶大小一致或略小,滤纸和海绵大小也要一致;制作“三明治”不能太厚也不能太薄,太厚容易使胶变形,条带弯曲,太薄气泡容易进入,导致条带不完整,这些都可以用增加减少滤纸量来改善;一定要把目的蛋白分子量区域贴在膜的中间部位;分清楚正极与负极,避免反方向转印;转印缓冲液要提前预冷,整个转印过程也需要在冰浴中进行。

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