重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则

1、针对不同的产物表达形式采取不同的策略
（1）采用分泌型战略表达重组蛋白，通常体积大、浓度低，因此应在纯化之前采用沉淀或超滤等方法先进行浓缩处理；
（2）采用包涵体型战略表达重组蛋白，应先离心回收包涵体；
（3）采用融合型战略表达重组蛋白，一般是胞内可溶性的，拟首先选用亲和层析进行纯化。
 
2、不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型
（1）等电点处于极端区域（pI≤5 或 pI≥8）的重组蛋白应首选离子交换法进行分离，这样很容易除去几乎所有的杂蛋白；
（2）重组蛋白特异性的配体、底物、抗体、糖链等都是首选亲和层析纯化方法的重要条件；
（3）疏水层析和反相层析是根据蛋白质的疏水性差异进行分离的；· 凝胶过滤层析是根据蛋白的分子量和体积差异进行分离的。

 3、多种分离纯化技术的联合运用
在进行重组蛋白的纯化时，通常需要综合使用多种技术，一般来说，首先选择能除去含量最多杂质的方法；将最费时、成本最高的分离纯化方法安排在最后阶段。

 4、合适分离纯化介质的选择
常用的蛋白质分离纯化介质有Sephadex和Seperose。理想的分离纯化介质应具有下列性质：
（1）对目标蛋白具有较高的分离效率
（2）对目标蛋白不会造成变性
（3）化学性能和机械性能稳定，重复性好
（4）价格低廉