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1、电泳的合适电压和温度
电泳时电压不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃,对于巨大的DNA电泳,温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高,可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
2、DNA样品的纯度和状态
注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐,用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失,也可能出现不规则的DNA条带迁移。上样前不要对DNA样品加热,用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
3、DNA的上样量
正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊,而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。通常情况下,适当减少上样量,更易得到好的DNA电泳带型。上海捷瑞企业DNA分子量标准每次上样5ul即可得到清晰均匀的条带。
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