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慢病毒包装过程

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时间:2022-09-20????浏览: ??【 打印此页】??【 关闭


      今天博特龙小编为大家先容一下慢病毒包装过程。博奥龙/biodragon是一家由留学归国人员创办的生命科学领域高新技术企业,专业从事新型生化试剂的研发和销售。
      1.293细胞密度接近90%左右时进行传代,加入37℃预热的胰酶进行消化,将消化离心混匀后的细胞种于10mm培养皿。将细胞置于含5%CO2的37℃温箱中孵育24h,当细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的50%以上时转染慢病毒质粒。
      2.取两个无菌1.5mlEP管,分别加入200µl无血清DMEM,其中一个EP管内加入1.5µg含有目的基因的病毒载体核心质粒和1.5µg病毒包装质粒,病毒包装质粒可按照pMDL:VSVG:REV=5:3:2比例加入;另一个EP管中加入6µl lipo2000。
      3.静止5分钟。然后将两管充分混匀,静置15-20min。
      4.将步骤3中的混合液逐滴加入细胞培养皿中,轻轻摇动平皿混匀,然后置于含5%CO2的37℃温箱孵育。
      5. 10h-16h后吸去培养基,加入适量37℃预热的完全培养基,继续将细胞放置温箱孵育。
      6.转染后24h、48h、72h左右收集含慢病毒的上清。1500rpm离心五分钟。
      7.将待转染的实验细胞平铺于35mm培养皿,12-24h后换液,密度为30%-50%。加入转染后24h收集的病毒液培养。可根据情况进行病毒液的再次感染。细胞长满后传代或者检测表达。

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