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慢病毒滴度快速检测卡
Catalog_noBF06202-10
Product_name慢病毒滴度快速检测卡(病毒包装专用)
Size10个/包
Category病毒包装试剂
Price540.00
应用检测范围约为0-3000ng(具体以批次报告为准)
说明书
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    说明:本类型检测卡检测范围约为:0-3000ng(本检测数据仅供参考,具体产品情况请参考相关批次检测报告)

    一、原理
     
     
           本产品是基于胶体金侧向层析技术的HIV-1 P24蛋白半定量检测卡,可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估(P24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白)。检测卡由层析膜、样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸、背板等结构组成。在层析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗体(质控线)和P24鼠单克隆抗体(检测线);在金标垫上固定有胶体金标记的另外一株P24鼠单克隆抗体。待测样品滴加到样品垫,通过毛细作用泳向金标垫,到达金标垫后,样品中的P24蛋白与金标垫鼠抗P24单克隆抗体结合形成复合物。复合物移动到检测线时,被检测线上的另一株P24鼠单克隆抗体所捕获。随着被捕获的复合物的堆积,在检测线上呈现出酒红色。当复合物泳动到质控线,羊抗鼠多抗捕获胶体金标记的鼠单克隆抗体,呈现酒红色。通过判读层析膜上检测线和质控线是否显色,判断样品中是否存在P24抗原。当样品中P24浓度变化时,检测线颜色的深浅与P24浓度呈正相关,通过与比色卡比较,可以半定量待检标本中P24蛋白浓度,并大致估算慢病毒的滴度。
     
     
     
    二、用途
    1.基于HIV-1的慢病毒载体包装效率检测:传统的慢病毒包装效率检测的方法有ELISA法(检测P24蛋白含量)和Real-time PCR法(检测核酸拷贝数),这两种方法都耗时费力,且成本高。本产品使用简便,检测时间短,可以随时对转染效果进行评估。如在更换培养基时,汲取样品滴加到试纸上,10-15min后即可判读结果。因此,使用本快速检测试纸,可以快速评估转染效果。
    2.基于HIV-1的假病毒包装效率检测:同样含有P24蛋白,在转染后,可以使用本检测卡对包装效果进行快速评估。
     
              
    图1. 检测卡显色样式
     
     
     
     
    图2. 比色卡
     
     
     
    *一个慢病毒颗粒(Lentiviral Particle, LP)中约有2000个P24蛋白分子,用以下公式可以计算慢病毒载体的颗粒数(LP):
    一个LP相当于:2000×24×103/(6×1023)g of P24=8×10-5 pg of P24;或者说,1ng P24=1.25×107 LPs(≈1.25×104-5 TU**)
    **正常情况下,每100-1000 LPs中会有1个具有感染活性的病毒载体,即1 TU(Transducing Unit)。
    注意:上述公式计算得到的LP值是理论值,检测样品中含有的游离的P24蛋白可能会使该值偏高。 
    提示:通常上清中病毒含量需要超过106 TU/ml,才能确保浓缩纯化后得到足够浓度的慢病毒载体(一般能浓缩150倍左右)。
     

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