QuickAntibody-Mouse3W用途

通过3周2针的标准免疫程序制备小鼠单克隆和多克隆抗体，ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）可达到1:10000-1:10000000。
 
QuickAntibody-Mouse3W使用方法（详见使用说明书） 
     
1.    用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度（按每针次50μl用量配制）。

备注：推荐使用的抗原用量为

（1）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1-5μg；

（2）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-20μg；

（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次20-50μg。

2.    充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比1:1迅速混匀。

备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。

3.    通过后腿小腿肌肉注射免疫小鼠（视频），每只小鼠注射100μl。

备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注射。

4.    第14天按同样方式加强免疫1针。

备注：每次佐剂和抗原现配现用。

5.    第21天采微量尾血进行ELISA测定，抗体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。
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如何选择QuickAntibody系列免疫佐剂？

QuickAntibody系列免疫佐剂包括以下具有自主常识产权、独特配方的新型免疫佐剂，分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体（见下表）。  
QuickAntibody系列免疫佐剂有哪些特点？

与常规使用的弗氏佐剂相比，QuickAntibody免疫佐剂具有免疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗体滴度高、抗体亲合力高、易获得构象型表位的抗体等多方面优点，详述如下：

1.    QuickAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。

2.    QuickAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-50μg（通常为小鼠5-20μg，

兔子20-50μg）；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1-10μg（通常为小鼠1-5μg ，兔子5-10μg）。

3.    QuickAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高。以标准免疫程序为例，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，只需要在三周内进行两针免疫，通常在第五周即可获得ELISA滴

度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗体水平。

4.    QuickAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

5.    QuickAntibody是水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免疫动物。

6.    QuickAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫或脾内免疫相比，极大方便了使用。

7.    QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。常规多克隆抗体制备多使用兔子，不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委

托专门单位制备。使用QuickAntibody免疫佐剂，任何实验动物人员均可方便快速地制备小鼠多克隆抗体，标准免疫程序只需要简单地免疫5只小鼠，即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克

隆抗体。（强烈推荐使用本佐剂制备小鼠多克隆抗体，1ml高质量的小鼠多克隆抗体足以满足绝大多数用户的实验需求，包括用于酶联免疫、免疫印迹、流式细胞、免疫组化和免疫沉淀等）。

8.    QuickAntibody建议常温运输，2~8ºC保存，无菌取用，有效期18个月。

1、用量类问题

1.1说明书里水佐剂全病毒、全细菌免疫抗原用量1-10ug指什么

说明书里的1-10ug是指的是全细菌或全病毒的总蛋白定量，但是总蛋白可能是不纯，非常杂，是否有效产生目标蛋白抗体，不确定。如果是纯的蛋白，1ug，甚至几百ng就够了

1.2 佐剂适用物种

目前QuickAntibody免疫过：小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、山羊、羊驼、鸡、猴子等多种物种，效果均不错。佐剂本身是多种佐剂的混合物，而不是单一佐剂。

1.3抗原浓度较低，能否增加佐剂用量

小鼠的免疫，大家一般建议是50ul佐剂+50ul抗原，也可以适当增加，或左右腿各一针，这样共计是100ul佐剂+100ul抗原；也可以适当降低一些佐剂的用量，佐剂里面的有效成分是富余的，根据情况可以降低20-30%一般问题不大。但是不建议抗原用量过大，比如说直接100ug以上去免疫小鼠，抗原不会得到充分利用，动物反应比较强烈，甚至死亡。

1.4 佐剂1ml可以免疫几只小鼠

每次免疫使用佐剂量为50ul，共两次免疫，因此1ml大概可以免疫8只小鼠
标准流程：1只小鼠免疫两针，50ul佐剂+50ul抗原，共100ul免疫1针，所以一只小鼠的佐剂用量为100ul。大家佐剂1ml一管，理论可以免疫10只，但是因为使用注射器损坏，离心管粘附等影响。只能免疫大概8只左右小鼠。

2、实验步骤相关问题

2.1 如何免疫及冲击免疫

现混现用、拿到动物房混匀，混完后10min内免疫到动物体内，时间一长，沉淀会缓慢下沉，有效成分分布不均，会对免疫效果造成影响；客户也可以在实验室先预混，到动物房后直接用枪头吹打混匀或上下摇晃混匀，不能用注射器吹打混匀，混不开。
如何免疫：博奥龙特色QuickAntibody水佐剂，免疫小鼠的部位是后腿根部内侧肌肉，是单点注射免疫，小鼠腿部肌肉不太多，针刺入不要太深，容易刺刀骨头；
冲击免疫方法：腹腔注射抗原20~50ug,体积在100~200ul。腹腔注射点在小鼠左侧或右侧的下腹部，避开肝脏和较低中腹部膀胱，沿腿的角度穿透腹膜。1ml注射器针头进入1/3左右，有刺空感。

2.2必须使用肌肉免疫么

大家佐剂有成分是后续用于人疫苗佐剂的，所有优化都是使用肌肉免疫优化，因此建议使用肌肉免疫，但是也可以使用皮下一点或二点免疫，不建议腹腔免疫。

2.3佐剂使用后鼓包或有流出

大家的佐剂是小鼠后退肌肉免疫，因部分客户之前使用腹腔免疫或皮下多点免疫，做肌肉免疫生疏，会鼓包，鼓包主要原因是打到了皮下，客户可以再扎深一些。初次使用，建议用酒精棉先擦拭后腿，免疫时避开后腿内侧两个静脉血管，可以在免疫后，将针头旋转半圈，静置几秒，拔出。

2.4能否缩短免疫间隔时间

一般不建议缩短，因为涉及到抗体的亲和力与效价问题，但是测血清效价，大家说明书是在2免后14天，时间上可以在2免后7-10天测效价，效价达标后几款冲击免疫做融合

2.5抗原溶剂

3、产品应用相关问题

3.1能否用于真核表达的质粒或者全病毒

质粒不行，蛋白和病毒可以

3.2能否用于细胞或病毒等非蛋白类抗原上

大家的佐剂经过数万种抗原免疫实验，目前的抗原种类有细胞、病毒、蛋白、多肽、多糖、脂类、重金属、抗生素、农药、毒品、食品安全类化合物等的免疫，效果均很好，有丰富的工业客户案例以及数百篇文献支撑。

3.3能否用于核酸质粒或RNA的免疫

核酸免疫，大家佐剂不适用，可以采用脂质体。

3.4能否用于疫苗研发

大家的佐剂有成分是用于疫苗研发的，但是合作要22年下半年后，大家佐剂成分是用于人用疫苗佐剂的开发，客户做动物疫苗，一般用不起，除非用于宠物与特种动物。

4、佐剂沉淀

沉淀是大家佐剂的有效成分，不能够离心去除，去年的佐剂沉淀较少，今年佐剂沉淀较多，佐剂在21年11月份做了更新换代，新的佐剂以及验证5年以上时间，效果更好。

5、佐剂的成分

该佐剂是大家企业的保密配方，具体成分不便告知。
可以提供一个英文的原理描述：QuickAntibody is a proprietary novel adjuvant designed specifically for the preparation of monoclonal as well as polyclonal antibodies in mice. It is formulated with PAMPs (pathogen associated molecular patterns) and cationic polymers to activate cytosolic PRRs (pathogen recognition receptors).

6、免疫2针后效价不理想

一般免疫原性较弱的抗原或初次使用大家产品的客户，2针后效价可能起不来，此时可以在2免后14天进行第三针免疫，一般可以有一个数量级的增长，但是最多免疫4针，4针后效价仍未起来，一般建议重新免疫或修改抗原。比较常见的是小分子抗原如多肽和小分子。多肽一般可以建议aa数量增加到20个以上，可以有效的增加抗体效价。

7、虽然抗体效价达到要求，但是小鼠脾脏没有发生肿大的原因

这个正常，传统的佐剂含有卡介苗，卡介苗是强免疫原，脾脏中很多B细胞是针对卡介苗的，所以就会大一些

8、佐剂的区别，如何选择，能否混用

小鼠五周佐剂是最先出来的，在小鼠五周佐剂的基础上优化出来3周佐剂与2周佐剂，主要成分一致，配比略有不同。因此一般不建议混用。兔子与小鼠佐剂差异大

9、水佐剂为何比弗氏佐剂贵

单看价格略贵，但是节约时间成本
1、节省一个月的时间成本及小鼠饲养成本
2、节省抗原用量，只需要原来的1/5-1/10，天然抗原1mg售价可达上万元

10、能否-20℃保存

大家佐剂成分非常稳定，做过50℃一个月测试，无影响。但是不能冻存，冻存对免疫效果会有较大影响。一般保存可以放在4℃冰箱靠门的一次，不放在最里面，部分冰箱温控不好，放到最里面温度低于0℃.

11、兔8w佐剂免疫一只兔子的抗体产量

大家这边兔多抗项目，有两种纯化方式：
（1）抗原亲和纯化
一般纯化10ml抗血清能获得1~3mg纯化后抗体，一只兔子能取50ml抗血清，这样总量应该在5~15mg左右；
（2）ProiIenA/G纯化
纯化20ml抗血清应该能拿到100~150mg左右纯化后抗体。
一般客户采用抗原亲和纯化的多一些，以前一个数据为主。（ps:这些是弗式佐剂免疫的结果）

12、弗氏佐剂免疫一针后，后续可否用快速佐剂

可以的，不同佐剂的功能是类似的，不同佐剂可以尝试交叉使用

13、能否与铝佐剂平行使用

可以结合使用，任何免疫方式都可以产生细胞免疫与体液免疫的效果。