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BCA蛋白定量分析试剂盒的作用是什么??
时间:2022-05-13    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


  BCA蛋白定量分析试剂盒是进行蛋白质浓度测定的最常见的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白质在碱性条件下,可以将二价Cu2+离子还原成一价Cu+离子。产生的一价Cu+离子可以与BCA(Bicinchoninic acid)试剂结合,最终生成紫色的复合物。该复合物在562 nm处有很强的吸取峰。复合物的多少与蛋白质的浓度呈接近的线性关系。
 
  BCA蛋白定量分析试剂盒
 
  使用方法
 
  1.BCA工作液的配制
 
  (1)BCA工作液总体积的计算:
 
  BCA工作液总体积=(标准品数量+待测样品数量+1)×重复数×200μL。
 
  举例:如果标准品数量为8,待测样品数量1,重复数为3,则BCA工作液总体积=(8+1+1)×3×200μL=6000μL
 
  (2)BCA工作液的配制:按50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1),充分混匀。
 
  举例:将5000μL的BCA试剂A与100μL的BCA试剂B混合,得到5100μL的BCA工作液。
 
  2.BSA标准品的配制
 
  将BSA标准品做系列稀释,分别得到如下9个不同浓度的标准品:2000μg/mL,1500μg/mL,1000μg/mL,500μg/mL,250μg/mL,125μg/mL,62.5μg/mL,31.25μg/mL,0μg/mL。
 
  注:严格的蛋白定量,BSA标准品的稀释溶液应该与待测蛋白样品的溶液相同。但是一般情况下,BSA标准品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去离子水进行稀释。
 
  3.取BSA标准品和待测样品各25μL到96孔板孔内,
 
  注:正常情况下,样品与BCA工作液的体积之比应为1:8。如果样品体积有限,也可使用10μL BSA标准品和待测样品进行检测(即样品与BCA工作液的体积之比为1:20),这时BCA定量试剂盒的检测范围较小为125-2000μg/mL。
 
  4.往每孔中加入200μL的BCA工作液,盖上96孔板盖子。
 
  5.将96孔板放37℃,30分钟。
 
  6.用酶标仪测562 nm处的光吸取值。
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