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单抗制备??
时间:2022-06-22????浏览: ??【 打印此页】??【 关闭


      单克隆抗体的生产技术1975年是由Köhler和Milstein发明的。作为功能分子的单克隆抗体不仅可用于基础科学,还可用于药物、测试药物、生物传感器等领域。近年来,以单抗为主的药物在中小药品销售中占主导地位,预计到2023年底,市场收入将达到2189.7亿美金左右。单克隆抗体也是一种极具价值的功能生物材料,不仅在生命科学研究中有广泛的应用,而且在抗体药物和试验药物中也有广泛的应用。
       
      单克隆抗体有两种类型:一种是识别初级蛋白结构的线性表位的抗体,另一种是识别二级、三级和更高结构的抗体。在生命科学研究中,使用识别线性表位的抗体包括ELISA和Western blotting方法。然而,使用这类抗体的应用有限,而结构识别抗体有广泛的应用,如免疫沉淀,免疫染色。当单抗用作药物时,结构识别抗体尤为重要。由于靶蛋白在体内通过形成一个合适的三维结构来发挥作用,因此,抗体识别蛋白质的三维结构以抑制药理作用是至关重要的。因此,用立体特异性单克隆抗体取代线性表位单克隆抗体是必要的。

      
大量生产单克隆抗体的方法主要有三种:(1)大量培养杂交瘤细胞,从细胞培养上清液中获取单克隆抗体,一般细胞培养液内的抗体含量为10~60μg/ml;(2)将对数生长期的杂交瘤细胞按1~3×107/ml接种于小鼠皮下,每处注射0.2ml,每只注射2~4个点。待10~20天左右即可进行采血,从血清中获得的单克隆抗体的含量可达1~10mg/ml。(3)小鼠腹腔注射0.5ml液体石蜡油7天后,将杂交瘤细胞按照1~2×106cell/只小鼠的量打进腹腔。在小鼠濒死时收集腹水,一般一只小鼠可获得5~10ml腹水,腹水中单克隆抗体含量可达5~10mg/ml。收集腹水的同时也可将腹水中的细胞冻存起来,用冻存复苏后的细胞接种小鼠腹腔可产生更多的腹水且腹水产生速度更快。

       杂交瘤细胞的克隆化一般是指针对于抗体阳性孔的克隆化。因为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际实验操作中,会有数个或者更多的克隆,其中可能包括所需的抗体分泌细胞,抗体非分泌细胞,及其他无关抗体的分泌细胞。要想将这些细胞分开就需要进行克隆化。克隆化的原则是,对于检测抗体阳性的杂交克隆尽早进行克隆化。因为非抗体分泌细胞的生长速度比抗体分泌细胞的生长速度快,抗体分泌细胞的生长就会被抑制,最终二者的竞争结果会造成抗体分泌细胞的丢失。即使克隆化过的细胞也需要定期进行再克隆,以防杂交瘤细胞突变或染色体丢失,从而丧失产生抗体的能力。


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