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学术前沿

实验新人选择ELISA试剂盒的正确步骤??

时间:2022-05-25    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


  首先,你要明确研究种属:
 
  一般来说,厂家都会在产品名称上标明种属,且为首个单词,检索种属的常用语言为英文。
 
  如果您需对不同物种的同一因子进行定量,建议优先寻找适用于多个种属的ELISA试剂盒,产品先容中会注明「Multi-species」。
 
  其次,要明确样本类型:
 
  不同厂家验证样本类型不同,即使同一厂家不同试剂盒,其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本,根据样本处理方式的差异,分为EDTA血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆,因此购买前需仔细核对。
 
  第三步:要会预测自己的目标因子的浓度
 
  一般来说,待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围,且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子IL-6,正常人血清中浓度为3.13 pg/mL,病人会显著增高,CAR-T回输病人血清中的IL-6浓度甚至为正常人的200倍以上。
 
  因而,必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。
 
  若浓度太低,可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大,建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。
 
  如同样为IL-6 ELISA试剂盒,各类型检测范围差异较大,需要根据实际情况选择合适的试剂盒。
 
  第四步:检查试剂盒进行过哪些质控
 
  质控数据在说明书中即可找到,在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验,包括批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试等,每个数据最好都看一下,确保超强的结果重现性及准确性。
 
  第五步:确定需检测的因子数量
 
  如果待测因子超过5个,且样本量较小时,单因子ELISA检测方法并不是最佳选择。
 
  建议考虑多因子检测方法,如固相芯片(样本数量一般5个以内,检测指标可达上百个)及Luminex液相芯片方法(检测样本多达80个,检测指标多达50个)或微流控ELISA检测系统Ella。
 
  可节约样本及时间成本,也可保证检测结果准确。
 
  第六步:预算评估
 
  预算往往是大家优先考虑的,实际上,不能够一味讲究产品价格,更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学,一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中必不可少的因素,即使低廉的价格,不能够完美重现结果,也是资源的另一种浪费。
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