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学术前沿

单克隆抗体制取的基本步骤??

时间:2022-07-12    浏览:   【 打印此页】  【 关闭


  单克隆抗体制取的基本步骤
 
  (1)免疫力小动物
 
  免疫力小动物是用目地抗原体免疫力小白鼠,使小白鼠造成过敏反应B淋巴细胞的全过程。一般采用6-8周龄雌虫Balb/c小白鼠,依照事先制订的免疫力计划方案开展免疫力注射。抗原体根据血液循环系统或血循环进到颈静脉免疫器官,刺激性相对B淋巴细胞复制,使其活性、繁衍,并分裂变成过敏反应B淋巴细胞。
 
  (2)细胞融合
 
  选用目光切除放血法处决小白鼠,无菌操作原则取下肝脏,在平皿内挤压成型碾磨,制取脾体细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小白鼠脾体细胞按一定占比混和,并添加促结合剂聚乙二醇。在聚乙二醇功效下,网织红细胞可与骨髓瘤细胞产生结合,产生杂交瘤细胞。
 
  (3)可选择性塑造
 
  可选择性塑造的目地是挑选结合的杂交瘤细胞,一般选用HAT可选择性培养液。在HAT培养液中,未结合的骨髓瘤细胞因欠缺次黄嘌呤-鸟嘌呤-硫酸铵核糖转移酶,不可以运用挽救方式生成DNA而身亡。未结合的网织红细胞虽具备次黄嘌呤-鸟嘌呤-硫酸铵核糖转移酶,但其自身不可以在身体之外长期性生存也慢慢身亡。仅有结合的杂交瘤细胞因为从脾体细胞得到了次黄嘌呤鸟嘌呤硫酸铵核糖转移酶,并具备骨髓瘤细胞能繁衍的特点,因而能在HAT培养液中生存和繁衍。
 
  (4)杂交瘤呈阳性复制的挑选与复制化
 
  在HAT培养液中生长发育的杂交瘤细胞,仅有极少数是代谢预订单克隆抗体的体细胞,因而,务必开展挑选和复制化。一般选用有限稀释液法开展杂交瘤细胞的复制化塑造。选用医学免疫学方式,挑选出能造成所需单克隆抗体的呈阳性杂交瘤细胞,并开展复制增加。历经评定其所代谢单克隆抗体的丙种球蛋白种类、亚类、特异性、感染力、鉴别抗原体的表位以及相对分子质量后,马上开展冻存。
 
  (5)单克隆抗体的制取
 
  单克隆抗体的很多制取关键选用小动物身体诱生法和身体之外塑造法:
 
  血压身体诱生法取Balb/c小白鼠,最先腹部注射0.5ml液體石腊或降植烷开展预备处理。1-2星期过后,腹部内打疫苗杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小白鼠腹部内繁衍,并造成和代谢单克隆抗体。约1-2周,由此可见小白鼠腹部彭大。用注射器提取肝腹水,就可以得到单克隆抗体。
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